尊龙人生就是博旧版
资讯中心Information Center
结核菌特异性分泌蛋白的检测及其应用
来源:  发布时间:2014-05-09

尊龙人生就是博旧版 www.jaggedlit.com 近年来结核病疫情呈现上升趋势,是目前感染率和死亡率最高的传染性疾病,对结核病的早期诊断及疗效观察的检测要求越来越高。目前实验室主要依据结核菌的培养,抗酸染色和PCR方法,对血清中结核抗体的临床检测结果褒贬不一(1)。

 

我们采用酶联免疫吸附试验检测血清及各种体液中的结核菌特异性分泌蛋白,现报告如下:
对象与方法
一、 研究对象:结核病例组:2003年1月至2005年6月我院感染科160例结核患者,均为初治患者,男102例,女58例,年龄13-61岁。诊断标准以《肺结核诊断和治疗指南》为标准。其中肺结核126例,结核性脑膜炎14例,结核性胸膜炎16例,结核性腹膜炎4例。对照组:选择健康查体中胸透正常、无结核病史的健康人,男女各20例,年龄24-51岁,平均34岁。
二、 方法
1、试剂 酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中特异性分泌蛋白试剂由台湾尊龙人生就是博旧版科技有限公司提供。
2、标本采集与处理:采集所有受试对象(结核病患者在接受抗结核治疗前)空腹静脉血3ml,3000转/min离心,分离血清,-20℃ 保存。然后采集受试者抗结核治疗后24h、48h、96h、7天、14天、30天后空腹静脉血3ml,离心分离血清,-20℃  保存。
3、测定 ELISA检测按试剂盒说明书进行。具体过程如下:(1)取100ul不同浓度的标准品及血清加入反应在孔中,25 ℃ 放置1小时。(2)冲洗3次后,加入酶标记的抗体,25℃ 放置1小时。(3)冲洗3次后,加入TMB显色液,20分钟后,在所有孔内都加入100ul终止液,混匀后即用Labsystems酶标仪(芬兰制造)在450nm处测定各孔溶液的吸光度(A450)值。酶标仪内计算机自动读取并显示标准曲线上与各吸光度相对应的浓度数值,cut off值吸光度为0.42。痰液及胸腹水抗酸染色按《全国临床检验操作规程》第二版进行操作。
结果
一、 160例结核患者血清结核菌特异性分泌蛋白(A法)与抗酸染色(B法)检测结果见表1。160例结核患者经ELISA方法检测血清中结核菌特异性分泌蛋白阳性率为93.1%(149/160),结核患者标本经抗酸染色检测阳性率为30.6%(49/160),经X2检验,二者有显著性差异(P〈0.01〉。
表1 160例患者血清结核菌特异性分泌蛋白与抗酸染色检测结果比较
分组
例数
A法检出率(%)
B法检出率(%)
结核组
160
93.1(149/160)
30.6(49/160)*
对照组
40
0
0
注:*P〈0.01
二、两种检测方法的敏感性和特异性比较:见表2。
表2  血清结核菌特异性分泌蛋白与抗酸染色法检测敏感度和特异性的比较
方法
例数
敏感性(%)
特异性(%)
A
160
30.6*
100
B
160
93.1*
93.9
*P〈0.01
表2显示,血清结核菌特异性分泌蛋白检测结核菌的敏感度为93.1%,特异性为93.9%,与抗酸染色法相比有显著性差异,特异性经统计学分析二者无显著性差异。
三、抗结核治疗后血清中结核菌特异性蛋白会计师的动态变化。观察49例抗酸染色查到结核菌的患者治疗后不同时间点结核菌特异性分泌蛋白含量变化,并同时进行痰液抗酸,结果发现46例患者抗结核治疗48小时后结核菌分泌特异性蛋白的会计师开始降低,14天后检测不到结核菌分泌特异性蛋白。在治疗7天后有43例痰标本中仍能查到结核菌,但结核菌的数量明显减少。另外3例患者治疗14天后结核菌分泌特异性蛋白的含量没有变化,抗酸染色查到结核菌,提示耐药结核菌的存在。
讨论:
抗结核药物的不合理应用使耐药菌株不断出现,致使结核病的疫性成为感染率和残废率最高的传染性疾病。在结核病的临床诊断方法中,涂片镜检和培养是经典的细菌学检测方法,抗酸染色法虽然具有简便、快速、特异性高的优点,但其敏感性差、阳性检出率低,平均检出率只有25%~35%(2),我们应用抗酸染色检测阳性率为30.6%,与文献报道相近。另外抗酸染色法无法区分死菌与活菌,因此其在临床的应用受到限制。不过抗酸染色法的阳性,检出结果具有不可替代的诊断参考价值。细菌培养法由于结核菌生长缓慢,耗时长(常规培养需4~6周),对培养基要求高等也影响其阳性检出率,临床很少采用培养方法检测结核菌。我们采用ELISA方法检测结核菌分泌特异性蛋白,由于该方法检测活结核菌分泌的特异蛋白,对于初诊的未用抗结核药治疗的疑似患者具有很高的阳性率和特异性。通过对160例结核患者结核菌分泌特异性蛋白的检测,发现其敏感率93.1%,明显优于抗酸染色法,同时该方法也具有很高的特异性(93.9%),因此,我们认为结核菌分泌特异性蛋白的检测可以用于临床对初诊结核疑似病人的筛查试验。
结核菌分泌的特异性蛋白是由活的结核菌所分泌,定量检测可以用于抗结核治疗的效果观察,我们的试验结果发现抗结核治疗48小时后结核菌分泌特异性蛋白的含量开始降低,并随着疗程的延长而降低。同时,定量检测结果对于耐药结核菌也有一定的提示作用,抗结核治疗无效的患者,其血清中结核菌特异性蛋白的含量没有明显变化。
 我们的试验结果表明,结核菌分泌特异性蛋白可以做为对初诊结核疑似病人的筛查及抗结核治疗的疗效观察。由于其只适用于治疗前活结核菌的检测,对于抗结核芗治疗后的患者,结核菌分泌特异性蛋白的诊断作用将会受到一定的限制。